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鸭疫里默氏杆菌毒力因子、诊断技术研究及应用

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  • 主要完成单位:中国农业科学院上海兽医研究所
  • 主要完成人员:于圣青,丁铲,韩先干,胡青海,王少辉,王小兰,刘海文
  • 起  止  时  间 :2010年1月—2013年12月
  • 获  奖  情  况 :2014年中国农业科学院科学技术成果奖二等奖
  • 内  容  提  要 :
     鸭疫里默氏杆菌病是由鸭疫里默氏杆菌(Riemrella anatipestifer)引起的一种严重危害雏鸭的细菌性传染病。本病呈急性败血症或慢性过程,以10~35日龄的雏鸭发病率最高,死亡率也高,耐过鸭多成为僵鸭,生长迟缓,造成极大的经济损失,及时采取有效的防治措施对控制该病的发生十分重要。由于国内外对鸭疫里默氏杆菌的分子生物学研究不多,因此其致病机理的研究进展缓慢,毒力基因或致病相关因子不是很清楚。另外由于该病的临床症状与常见的鸭大肠杆菌病和鸭沙门菌病十分相似,因此为了对该病进行有效防控,必须尽快进行确诊。为此该项目对鸭疫里默氏杆菌的毒力基因和诊断技术进行了研究,取得如下研究成果。
  (1)鸭疫里默氏杆菌可形成生物被膜,生物被膜的形成可增强RA对抗生素和去污剂的抵抗力,因此可能与RA在鸭场的长期存在相关。
  (2)建立了鸭疫里默氏杆菌基因组的转座子随机突变方法,获得了含有2560株突变株的转座子随机突变株库,并筛选获得生物被膜形成相关基因33个。
  (3)建立了鸭疫里默氏杆菌同源臂重组的基因定向突变方法,发现 ompA 是鸭疫里默氏杆菌的一种重要毒力因子。
  (4)建立了基于groEL 基因的 环介导等温扩增(LAMP) 快速诊断方法,在65℃的反应温度下,20分钟即可完成鸭疫里默氏杆菌的检测,检测限为10个菌落形成单位(CFU),比普通PCR敏感50倍。
  (5)建立了一种鸭源常见细菌(鸭疫里默氏杆菌、鸭大肠杆菌和沙门氏菌)的多重PCR鉴别诊断方法,可对上述3种细菌在2小时内进行快速鉴别诊断,检测限为1000个 菌落形成单位。
  该研究成果获得国家发明专利授权2项;发表SCI收录研究论文8篇,中文核心期刊研究论文4篇。获得国家发明专利授权的2种鸭疫里默氏杆菌检测试剂盒已在上海、广东、安徽、浙江、山东、广西等省区市进行临床应用,对鸭疫里默氏杆菌感染的准确快速诊断和及时采取有效控制措施发挥了重要作用,正在开展检测试剂盒的新兽药证书申报工作。
  该项研究成果的社会效益包括:①有效地对鸭疫里默氏杆菌进行快速检测和鉴别诊断;②有利于快速制定疫病的防控措施,最大限度地减少疫病损失;③有利于农民和养殖场增收致富、促进我国养鸭业的健康发展。
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