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猪链球菌(2型)病防治新技术研究与应用

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  • 主要完成单位:中国农业科学院兰州兽医研究所
  • 主要完成人员:柳纪省,李学瑞,白银梅,李宝玉,殷相平,王超英,李志勇
  • 起  止  时  间 :2006年01月—2012年12月
  • 获  奖  情  况 :2013年甘肃省科技进步奖三等奖
  • 内  容  提  要 :
     本项目属于兽医学研究领域,主要技术内容、特定及应用推广情况如下。
  (1)创立了一种新的猪源性球菌通用的PCR检测方法。目前的PCR方法,一般只能扩增一种特定病原目的基因片段。本项目利用链球菌延伸因子保守序列所设计的一对引物,可以对链球菌属6个菌群多菌种的病例进行检测。试验证实,该方法还能够扩增芽孢杆菌纲乳球菌属、肠球菌属、葡萄球菌属、芽孢杆菌属多个菌种,从种的水平上对细菌加以鉴定。
  (2)创立了一种链球菌新型分子分群方法。近年来,国际上主要采用丹麦学者Kilan的多位点序列分群方法研究链球菌。该方法虽然能够对6个链球菌群中的缓征,咽峡炎等3个链球菌群内各种链球菌之间的遗传演化关系进行系统分析,但在分析六群链球菌多个菌种之间的遗传演化关系时,所获得的系统进化树自举检验值很低。我们通过对链球菌基因组上2200多个基因的系统分析,综合比较,最终建立了一种新的多位点序列分析方法,能够准确地反应出各链球菌群之间的遗传关系及新种的分子鉴定。
  (3)提出了一种细菌性新型基因工程疫苗理念并证实该理念具有可行性。通过敲除猪链球菌2型菌株基因组上的D-丙氨酸消旋酶基因,从而使得猪链球菌细胞壁的合成受阻,细菌复制受到抑制,在添加有一定量外源D-丙氨酸的条件下,细菌才能够大量复制,用该营养缺陷菌株试制疫苗,经安全性以及免疫效力等试验,证实该理念具有可行性,并成功研制了外源营养依赖型猪链球菌(2型)基因工程疫苗。
  (4)调查了猪链球菌病的流行态势:建立了猪链球菌(2型)ELISA检测方法。将该方法与链球菌通用PCR检测方法相结合,调查了甘肃、青海、宁夏三省区15个地区的99个猪场的猪链球菌流行态势,分离鉴定了疑似猪链球菌(2型),并进行了药敏试验,对养殖场猪链球菌病的防治提供技术支持,减少了抗生素的使用,提高了猪只的出栏率。产生了较为可观的经济效益和社会效益。据粗略估计,获得间接经济效益1300余万元。
  (5)申报发明专利2项。发表论文3篇,其中SCI论文2篇。
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